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菌株保存方法(五)——冷凍保藏法

發(fā)布日期::2021-09-10 作者: 瀏覽:0

冷凍保藏法

可分低溫冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。


冷凍保藏法之液氮冷凍保藏法及操作步驟

(1)準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm 的,或能容1.2mm 液體的。

(2)加保護劑與**保存**、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時,則將空安瓿管塞上棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃** 15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內(nèi)預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限,而后再用1.05kg/cm2>,121.3℃**15 分鐘。

(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,裝入已**的安瓿管;霉菌菌絲體則可用**打孔器,從平板內(nèi)切取菌落圓塊,放入含有保護劑的安瓿管內(nèi),然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

(4)凍結(jié)再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結(jié)至-30℃。若細胞急劇冷凍,則在細胞內(nèi)會形成冰的結(jié)晶,因而降低存活率。

(5)保藏經(jīng)凍結(jié)至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內(nèi),然后再將小圓筒放入液氮保藏器內(nèi)。液氮保藏器內(nèi)的氣相為-150℃,液態(tài)氮內(nèi)為-196℃。

(6)恢復培養(yǎng)保藏的菌種需要用時,將安瓿管取出,立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍,直到全部融化為止。再打開安瓿管,將內(nèi)容物移入適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

此法除適宜于一般微生物的保藏外,對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫**、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏,而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。