載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

載體保藏法操作步驟

1．濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm 的小條，裝入0．6×8cm 的安瓿管中，每管1—2 張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃** 30 分鐘。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長(zhǎng)。

（3）取**脫脂牛乳1—2ml 滴加在**培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

（4）用**鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰熔封，保存于低溫下。

（7）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

**、酵母菌、絲狀**均可用此法保藏，前兩者可保藏2 年左右，有些絲狀**甚至可保藏14—17 年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備。

2．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀**，加熱煮沸30 分鐘，以去除其中的有機(jī)質(zhì)。

（2）倒去酸水，用自來(lái)水沖洗至中性。

（3）烘干，用40 目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通過(guò)100 目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒。

（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據(jù)需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g 左右， 塞上棉塞，進(jìn)行**，烘干。

（7）抽樣進(jìn)行無(wú)菌檢查，每10 支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 48 小時(shí)，若仍有雜菌，則需全部重新**，再作無(wú)菌試驗(yàn)，直至證明無(wú)菌，方可備用。

（8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長(zhǎng)豐滿的，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好） 優(yōu)良菌種，以無(wú)菌水洗下，制成孢子懸液。

（9）于每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤(rùn)濕為宜）孢子懸液， 以接種針拌勻。

（10）放入真空干燥器內(nèi)，用真空泵抽干水分，抽干時(shí)間越短越好，務(wù)使在12小時(shí)內(nèi)抽干。

（11）每10 支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況和有無(wú)雜菌生長(zhǎng)，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長(zhǎng)，則說(shuō)明制作的沙土管有問(wèn)題，尚須進(jìn)一步抽樣檢查。

（12）若經(jīng)檢查沒(méi)有問(wèn)題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

（13）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

此法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在***工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用*廣，效果亦好，可保存2 年左右，但應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞效果不佳。